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植物基因組DNA快速提取試劑盒(N1191-N1192-N1193)

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N1191(50次) N1192(100次) N1193(200次)

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產品組分
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● 漂洗液PE 初次使用前用無水乙醇按1: 3 稀釋,即含75%乙醇。

● 客戶自備試劑

   無水乙醇

   巰基乙醇 

   氯仿(或酚:氯仿/1 :1)


產品說明

本產品可用于擬南芥、煙草、水稻等植物樣本的基因

純化。純化原理是利用硅膠膜柱可逆吸附體系中的

DNA,經漂洗液清洗除去蛋白質、脂質以及多

純化液洗脫獲得基因組DNA。一次可從不超過100

材料中提取到 2-20       μg  的高純度基因組

OD260/OD280=1.7-1.9),此基因組DNA 可直接

 酶切等后續實驗。

 

質量控制

純化的基因組 DNA 質量通過限制性酶切和單拷

 

保存條件

RNase 保存于-20℃。其他的室溫保存

 

注意事項--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

● 漂洗液PE 第一次使用前請按瓶上標簽加入3 倍體積的無水乙醇,即15   ml 漂洗液PE 加入45   ml 無水乙醇,30   ml 漂洗液PE

  加入90 ml 無水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。

● 緩沖液GPL 室溫保存可能會有沉淀產生,在56℃加熱溶解,待恢復室溫后混勻即可使用。不會影響基因組DNA 純化效率。

● 應盡量使用新鮮的實驗材料,確保提取的基因組DNA 不被降解。不能立刻提取基因組DNA  的實驗材料應盡快置于液氮或-70℃ 

  冰箱中保存并避免反復凍融。

● 使用液氮研磨組織材料時,應隨時加入液氮,確保提取的基因組DNA 不被降解。

● 基因組DNA 需長期保存時,建議使用純化液TE 。用無菌的離心管分裝后保存于-20 ℃或-80 ℃。

● 所有離心步驟均為室溫下進行。 

● 請嚴格按照操作步驟操作。

 

操作步驟--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

1  取植物新鮮組織約100 mg 或干重組織約30 mg,加入液氮充分研磨。

2  將研磨好的粉末迅速轉移到預先裝有700 μl 65℃預熱緩沖液GPL 的離心管中(實驗前在預熱的GPL 中加入巰基乙醇,使其終

   濃度為0.1% ),加入1 μl RNase,迅速顛倒混勻后,將離心管放在65℃水浴20 min,水浴過程中顛倒離心管以混勻樣品。

3  加入700 μl 氯仿,充分混勻,12,000 rpm  (~13,400 ×g )離心5 min 。

   ● 如果是提取富含多酚或淀粉的植物組織,可在第3 步前,用酚:氯仿/1 :1 進行等體積抽提。

4  小心將上一步所得上層水相轉入一個新的離心管中,加入等體積緩沖液GPD,充分混勻。

5  將混勻的液體轉入純化柱,靜置1 min,12,000 rpm 離心30 sec,棄濾液。(吸附柱容積為700 μl 左右,可分次加入離心。)

6  向純化柱中加入500 μl 去蛋白液PS。12,000 rpm 離心30 sec,棄濾液。

7  向純化柱中加入500 μl 漂洗液PE。12,000 rpm 離心30 sec,棄濾液。

8  重復步驟7,向純化柱中加入500 μl 漂洗液PE。12,000 rpm 離心30 sec,棄濾液。

9  離心純化柱,12,000 rpm 離心2 min,以徹底去除純化柱中殘留的液體。

   ● 此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免影響后續的酶促反應(PCR 或酶切)。同時利于基因組DNA 充分溶解。

10  將純化柱置于新的1.5 ml 離心管中。向純化柱中央處,懸空滴加40-100μl 純化液TE 。室溫放置2 min 。12,000 rpm 離心2 min,

   管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。

  ● 純化液TE 可用去離子水代替,但其pH 需為8.0-8.5 。

  ● 對純化液TE 60℃預熱,會提高基因組DNA 的產量。


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